Seqüenciació de gens EBS (2025)

Estem profundament agraïts a DEBRA UK, no només pel finançament sinó també per creure en la importància de la recerca en regions poc representades. Gràcies per fer possible aquesta tasca i per ajudar-nos a donar veu —i respostes— a les famílies amb EB a l'Argentina.

Els investigadors van estudiar l'ADN de 180 persones que semblaven tenir EBS i van identificar la causa genètica específica per a 161 d'elles. 114 persones tenien canvis genètics en els gens de la queratina (EBS). Els investigadors van trobar 27 canvis genètics diferents en el gen de la queratina-5, 10 dels quals no s'havien reportat mai abans.

44 d'aquests pacients presentaven un canvi específic (anomenat KRT5:c.1649del) i havien estat diagnosticats amb EBS amb pigmentació clapejada (taques fosques a la pell) o EBS amb eritema circinat migratori (pegats vermells en forma d'anell). El treball genètic va demostrar que aquests dos subtipus amb noms diferents en realitat són causats pel mateix canvi genètic.

Una minoria de pacients no semblava tenir canvis genètics en els gens de la queratina-5 o la queratina-14, per la qual cosa els investigadors van comprovar altres gens associats amb l'EB. Es va trobar que 17 persones tenien un canvi genètic en el gen del col·lagen-7, per la qual cosa se'ls va diagnosticar EB distròfica (DEB). Altres 11 persones tenien EB de la júnioritat (JEB), EB de Kindler (KEB) o EBS causada per canvis en altres gens.

No es va trobar cap causa genètica clara per a 19 de les 180 persones amb símptomes semblants a la síndrome de l'esclerosi lateral amiotròfica (SEB).

Els investigadors han fet els primers passos per crear un registre nacional de pacients amb EB a l'Argentina, cosa que els permet fer-se una idea de quantes persones a l'Argentina estan afectades per la malaltia per primera vegada.

Van publicar el seu treball descrivint quantes persones es veuen afectades per l'EB en un cartell al Congrés Mundial de Dermatologia Pediàtrica de l'abril de 2025, i a cartell al Congreso Argentino de Dermatologia 2024. 

Actualització de vídeo 2024:

Investigador principal: La Dra. Laura Valinotto és investigadora del Consell Nacional d'Investigacions Científiques i Tècniques d'Argentina i investigadora principal (PI) al CEDIGEA. És Màster en Biotecnologia per l'Escola de Bioquímica i Farmàcia de la Universitat Nacional de Rosario, Argentina i va obtenir el seu doctorat a l'Escola de Bioquímica i Farmàcia de la Universitat de Buenos Aires, amb el seu treball en epidemiologia molecular del virus respiratori pediàtric. infeccions al Laboratori de Virologia de l'Hospital Infantil R. Gutiérrez. Mentre acabava el seu doctorat, va començar a treballar com a voluntària al Departament de Dermatologia de l'hospital per trobar una manera de diagnosticar els pacients amb genodermatosi que assistien a l'hospital públic infantil. Després d'alguns anys, va ser una de les fundadores del Centre de Recerca en Genodermatosi i Epidermòlisi Bullosa (CEDIGEA), de la Universitat de Buenos Aires (UBA). Aquí continua el seu treball en el diagnòstic molecular de genodermatosis, juntament amb la investigació molecular epidemiològica de la població per tal de desenvolupar algorismes per realitzar un diagnòstic rendible de pacients amb ingressos baixos i construir registres clínics i moleculars detallats de l'EB per entendre millor la patogènesi de la malaltia. la malaltia.

Co-investigadors: La professora Graciela Manzur és professora i cap del Departament de Dermatologia de la Facultat de Medicina de la Universitat de Buenos Aires. És neonatòloga, pediatra i dermatòloga i va treballar com a dermatòloga pediàtrica a l'Hospital Infantil R. Gutierrez durant més de 15 anys on va aconseguir obrir una nova secció de Malalties Rares de la Pell a l'Hospital. Després d'uns anys, i juntament amb un grup multidisciplinari, va fundar el CEDIGEA, d'on n'és la Directora. Després de veure créixer tants nens amb EB, es va adonar de la necessitat d'un lloc on poder tractar pacients adults d'EB i va posar en marxa un segon centre CEDIGEA, per a adults, a l'Hospital de Clíniques de la Universitat de Buenos Aires.

La doctora Mónica Natale és bioquímica implicada en el diagnòstic molecular de genodermatosis a l'Hospital Infantil R Gutiérrez. També va ser una de les fundadores del CEDIGEA i és responsable del laboratori molecular, identificant nous casos d'EB i desenvolupant noves estratègies per al diagnòstic d'altres genodermatosis.

"El benefici individual per a cadascun dels nostres pacients amb EB és que es disposarà d'un diagnòstic molecular per determinar el tipus i subtipus d'EB i proporcionar un diagnòstic inequívoc que és essencial per oferir la millor atenció i assessorament genètic. El benefici col·lectiu és que la informació recollida sobre la prevalença de variants pot ser útil per escurçar l'odissea diagnòstica per als futurs pacients... i oferir un pronòstic més precís. A més, en poblacions amb antecedents genètics inexplorats, aquests estudis podrien revelar una diversitat de variants patògenes prèviament desconeguda que s'hauria de tenir en compte a l'hora de definir objectius per a teràpies gèniques".

– Dr Valinotto

Títol de la beca: Epidemiologia molecular de la epidermòlisi bullosa simple a l'Argentina.

Un dels principals objectius del Centre de Recerca en Genodermatosis i Epidermòlisi Bullosa (CEDIGEA) a l'Argentina és proporcionar a tots els pacients amb EB un diagnòstic precís per tal d'abordar millor i més eficaçment els símptomes que pateixen, gestionar el dolor i proporcionar l'atenció interdisciplinària que necessiten, independentment de la seva condició social. El nostre objectiu en aquest projecte és caracteritzar els nostres pacients clínicament i molecularment, ja que no hi ha molts informes d'EB a Amèrica del Sud. A CEDIGEA hem tingut l'oportunitat de publicar un estudi similar amb pacients amb DEB i Kindler, i el nostre objectiu és completar i publicar l'estudi dels pacients amb EBS.

El nostre Centre de Recerca en Genodermatosis i Epidermòlisi Bullosa (CEDIGEA) de la Universitat de Buenos Aires diagnostica i fa el seguiment de pacients sense assegurança mèdica a l'Argentina. L'objectiu d'aquest projecte és descobrir la prevalença i la diversitat de variants genètiques associades a l'EBS a la nostra població, que té un rerefons inexplorat. Poder informar si es troben noves variants a la nostra regió i construir una base de dades per determinar si es poden inferir noves associacions de fenotipgenotips és de gran importància. Aquest projecte de recerca ens permetrà, alhora, oferir als nostres pacients de baixos ingressos un diagnòstic molecular definitiu de manera gratuïta.

Amb l'ajuda de la Facultat de Buenos Aires i l'esforç dels professionals de CEDIGEA, vam tenir l'oportunitat de dur a terme amb èxit un projecte previ en què participaven pacients amb DEB, on vam diagnosticar 181 pacients de 136 famílies no emparentades, trobant 36 variants noves i un nou fenotip- associació de genotips.

Comprensió de l'epidermolisi bulosa simple a l'Argentina: què hem descobert i per què és important

Aquest projecte va néixer d'una necessitat clara: comprendre millor l'epidermolisi bul·lar simple (EBS) en persones d'Argentina, un grup que ha estat poc representat en la investigació sobre l'EB. Gràcies al finançament de DEBRA UK, vam poder dur a terme un estudi que no només va aprofundir el nostre coneixement d'aquesta malaltia, sinó que també va donar a les famílies les respostes tan esperades.

 El nostre treball es va centrar en l'anàlisi clínica i genètica de persones que havien estat diagnosticades o sospitades de tenir SEB. Vam estudiar més de 180 individus de 121 famílies que van acudir al nostre centre (CEDIGEA, amb seu a la Universitat de Buenos Aires) amb símptomes que suggereixen SEB o un altre tipus d'EB. La majoria d'aquestes famílies viuen en condicions de vulnerabilitat i tenen poc o cap accés a atenció especialitzada.

Per identificar la causa genètica de la seva condició, vam començar analitzant regions clau (anomenades "exons") de dos gens que se sap que estan implicats en la síndrome de l'esclerosi lateral amiotròfica (SBE): KRT5 i KRT14. Basant-nos en les nostres troballes anteriors en pacients locals, ens vam centrar primer en els exons 1 i 9 de KRT5 i els exons 1 i 6 de KRT14. Aquesta estratègia va resultar molt eficaç i assequible. El maig de 2024, havíem trobat la causa genètica de 104 pacients de 59 famílies.

Després vam ampliar la nostra anàlisi a altres parts dels mateixos gens i vam trobar 10 canvis genètics més que afectaven 29 pacients. A mesura que arribaven més famílies, vam diagnosticar nou individus més. En total, vam descobrir 27 variants diferents en el gen KRT5, 10 de les quals no s'havien descrit mai abans. Una variant en particular, anomenada KRT5:c.1649del, va destacar. Es va trobar en 44 persones de 16 famílies no relacionades i anteriorment només s'havia descrit en 11 famílies a tot el món.

Quan vam examinar més de prop aquests 44 pacients, vam notar una cosa remarcable: tot i que alguns havien estat diagnosticats amb EBS amb pigmentació clapejada (taques fosques a la pell), altres tenien pegats vermells en forma d'anell (un tipus conegut com a EBS-MCE). Ens vam adonar que no es tractava de dos subtipus diferents, sinó que formaven part del mateix espectre de la malaltia. En altres paraules, els símptomes poden canviar amb el temps, però la causa subjacent és la mateixa. Reconèixer això ajuda els metges a donar millors consells i a anticipar com podria evolucionar la malaltia.

Vam resumir aquestes troballes en un article científic titulat “Epidermolysis Bullosa Simplex with Mottled Pigmentation and Migratory Circinate Erythema: Distinct Subtypes or a Continuum?” (Epidermolisi Bullosa Simplex amb Pigmentació Tacada i Eritema Circinat Migratori: Subtipus Distincts o un Continuum?), que vam presentar a una revista especialitzada. Aquest és el primer d'una sèrie de tres articles que tenim previst publicar amb els resultats d'aquest projecte.

No tots els pacients tenien EBS. Per a aquells que encara no havien estat diagnosticats després de la primera ronda de proves, vam seqüenciar altres gens, especialment COL7A1, que està relacionat amb l'EB distròfica (DEB). Aquesta estratègia va conduir a 17 diagnòstics més. Per als 30 pacients restants, vam utilitzar tècniques de seqüenciació avançades que ens van permetre examinar molts gens alhora. Vam diagnosticar 11 pacients més amb una barreja de tipus d'EB, incloent-hi EB juncional, EB Kindler i EBS causada per gens més rars com PLEC i KLHL24. Al final, vam trobar una resposta genètica clara per a 161 dels 180 pacients.

Aquesta tasca té un significat enorme per a les famílies. Rebre un diagnòstic definitiu no només posa fi a la incertesa, sinó que també obre les portes a una millor atenció, assessorament genètic i, finalment, accés a tractaments o assajos clínics.

Per què importa aquesta obra

Una de les troballes més sorprenents va ser la freqüència de la variant KRT5:c.1649del a la nostra població, en comparació amb la seva raresa en altres llocs. Això destaca la importància d'estudiar l'EB en diferents parts del món. Si la recerca només es fa a Europa o Amèrica del Nord, ens perdem peces clau del trencaclosques.

També vam poder reconstruir com aquesta variant de la malaltia probablement es va propagar a través de famílies en una regió específica del nord-est de l'Argentina. Aquesta troballa confirma la idea d'una mutació fundadora, transmesa d'un avantpassat comú. Comprendre aquests patrons pot ajudar a guiar el cribratge i el diagnòstic futurs a la regió.

Més enllà de la ciència, aquest projecte va tenir un impacte més ampli. El suport de DEBRA UK va donar visibilitat a la nostra feina i va animar més metges de l'Argentina i els països veïns a derivar-nos pacients. Com a resultat, vam fer els primers passos per crear un registre nacional de pacients amb EB a l'Argentina, recopilant dades dels quatre centres principals que atenen persones amb EB. Això ens va permetre fer una estimació preliminar de la freqüència de l'EB al nostre país, una cosa que no s'havia fet mai abans.

Superant reptes

Malgrat l'èxit, el camí no va ser fàcil. L'Argentina està passant per una de les pitjors crisis econòmiques de la seva història. Vam patir greus retards en la importació de reactius, en la gestió de la inflació i en l'adaptació als costos canviants. En un moment donat, vam haver de revisar completament el nostre pla original, ja que no podíem comprar els reactius que esperàvem. Tot i així, gràcies a la pròrroga de sis mesos concedida per DEBRA UK i a un canvi d'estratègia, vam aconseguir complir tots els nostres objectius.

Què és el següent?

Ara estem treballant en dos articles científics addicionals d'aquest projecte. També continuem fent un seguiment dels pacients i treballem per compartir les nostres troballes amb dermatòlegs i pediatres locals per millorar el diagnòstic precoç a tot el país. El registre que hem iniciat serà una eina clau per planificar polítiques de salut pública, proporcionar un millor suport a les famílies i, amb sort, apropar-nos un pas més a tractaments accessibles. (De l'informe final del 2025.)

Estem profundament agraïts a DEBRA UK, no només pel finançament sinó per creure en la importància de la recerca en regions poc representades. Gràcies per fer possible aquesta tasca i per ajudar-nos a donar veu —i respostes— a les famílies amb EB a l'Argentina.

(De l'informe final del juny de 2025.)

Hem avançat molt en el nostre projecte al Centre de Recerca en Genodermatosi i Epidermòlisi Bullosa (CEDIGEA). Actualment, hem reclutat 180 pacients de 121 famílies que ens van derivar per sospita clínica d'Epidermolisi Bullosa Simplex (EBS) o una altra Epidermòlisi Bullosa de tipus indefinit.

El nostre objectiu principal era realitzar anàlisis genètiques per oferir diagnòstics moleculars, i alhora conèixer les bases genètiques de la malaltia a la nostra població. Fins ara, hem analitzat gens específics i hem aconseguit un diagnòstic molecular per a 104 pacients, la qual cosa és un èxit substancial. En fer-ho, hem identificat 31 variants patògenes diferents, amb 12 d'elles no informades anteriorment a la literatura.

Tanmateix, durant el nostre projecte van sorgir reptes. Ens hem trobat amb retards en l'adquisició dels reactius necessaris per a la seqüenciació genètica a causa de la inestabilitat econòmica i la modificació de la normativa al nostre país, amb els preus dels subministraments de laboratori un 300% més alts que fa tres anys. A causa d'aquests reptes, hem hagut de revisar la nostra estratègia per treure el màxim profit dels nostres fons de subvenció i garantir la consecució oportuna dels nostres objectius.

Pel que fa a les publicacions, estem preparant un manuscrit complet per presentar les nostres troballes. Creiem que estudiant un nombre tan gran de casos podrem detectar particularitats en cada pacient i grups de pacients, i aquestes dades seran útils per predir com evolucionarà la malaltia en els futurs pacients.

Pel que fa a la implicació del pacient, Magdalena i Josefina han estat fonamentals. A través del seu bloc “En mi piel”, han proporcionat valuoses idees i han creat una plataforma perquè els pacients comparteixin les seves experiències. Aquest enfocament centrat en el pacient guia el nostre enfocament de recerca i garanteix que el nostre treball abordi les necessitats dels afectats per l'epidermolisi bullosa i altres malalties rares de la pell.

En resum, malgrat els reptes, el nostre projecte està avançant bé, i estem compromesos a avançar en la investigació en el camp de l'epidermolisi bullosa en benefici dels pacients d'arreu del món.

I no volem perdre l'oportunitat de convidar-vos al V Congrés Argentí de Genodermatosis i Epidermòlisi Bullosa, en format virtual, els dies 19, 20 i 21 de setembre de 2024. Per estar al dia, seguiu-nos al nostre Instagram @cedigea .uba

(A partir de l'informe de progrés de maig de 2024.)